DETERMINISME GENETIQUE DU SEXE CHEZ LES MAMMIFERES

TD 2 DETERMINISME GENETIQUE DU SEXE CHEZ LES MAMMIFERES

1. Rappel de cours

1.1 L’AMH est exprimée par les cellules de Sertoli. Elle permet la régression des canaux de Müller.

Le gène SOX9 exprimé dans les crêtes génitales des deux sexes et dans les cellules de Sertoli chez la souris, joue un rôle dans l'activation du gène de l'AMH (Hormone Anti Müllerienne). La mutation avec perte de fonction d'une seule copie de SOX9 aboutit à une réversion du sexe chez des individus 46, XY.

SRY est un facteur de transcription codé par le gène SRY exprimé dans les cellules pré-Sertoli. Il possède un domaine HMG qui lie l’ADN pour réguler la transcription des autres gènes.

1.2 L’immunofluorescence est une technique de reconnaissance spécifique d’un antigène par un anticorps couplé à un marqueur fluorescent.

Figure 1 : l’AMH est révélé par un anticorps couplé à un fluorochrome vert. Les cellules sont marquées par des noyaux en bleus. On détecte de l’AMH et SOX9 seulement chez les souris XY males.

2. Cascades de gènes impliqués dans l’organogenèse des gonades

2.1.1 FGF9 → chez les 2 sexes avant la détermination sexuelle. / maintenu que chez les males.

Knock out : KO inactivation d’un gène nécessaire pour la synthèse d’une proteine fonctionelle. On créer une souris génétiquement modifiée mutante homozygote.

Chez les individus males homozygotes mutants pour FGF9, on observe une inversion du phénotype. Les gonades se différencient en ovaires.

Je conclus que FGF9 est un gène indispensable à la différenciation des gonades en testicules ainsi qu’à son maintien.

2.1.2 figure 2 : 

A 11.5 jour et a 12.5 : chez une souris FGF9 +/- → présence de SOX9 de même quantité

A 11.5 jour : chez une souris FGF9-/- → présence de SOX9

A 12.5 jour : chez une souris FGF9 -/- → traces de SOX9

Je conclus que FGF9 est indispensable pour le maintien de SOX9 mais a 11.5 j, je pense qu’il y a un autre facteur qui intervient.

2.1.3 : Hybridation in situ : localisation d’ADN ou ARN simple brin via une sonde. Technique qui repose sur le principe de complémentarité de bases.

On regarde si l’ARNm de FGF9 est présent dans les crêtes génitales chez les souris males.

Souris mutantes homozygotes pour SOX9 → ARNm FGF9 réduits

Donc a 11.5 j SOX9 est nécessaire pour le maintien de FGF9.

2.1.4 : A 12.5 j la présence d’AMH nécessite la présence de FGF9.

2.2 WNT 4

2.3.1.1 WNT4 est maintenue chez les femelles mais inhibée chez les males.

Figure 6 :

WNT 4 +/- chez les femelles –> pas de SOX9

WNT4 +/- chez les males  → présence de SOX9

WNT4 -/- chez les femelles → présence de SOX9

Je conclus que WNT4 joue un rôle dans l’inhibition de SOX9 chez les femelles.

WNT4 n’inhibe pas SOX9 chez les souris males.

Figure 7 :

WNT4 +/- chez les males → FGF9

WNT4 +/- chez les femelles → pas de FGF9

WNT4 -/- chez les femelles → FGF9

Je conclus que WNT4 joue un rôle dans l’inhibition de FGF9 chez les femelles.

Ce qui explique bien le fait qu’il n’y a pas de SOX9 car FGF9 est indispensable pour le maintien de SOX9.

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