Cours enzymologie

CM ENZYMO

Vitesse = qtité de substrat transformé en unité de tps

        I. Fixation d’un ligand sur des sites indépendants – représentation de Scatchard

Insuline va d’abord intéragir ac une prot de la cell. Insuline considéré cô un ligand & va intéragir ac un récepteur (prot cell). On va quantifier l’affinité du ligand ac la prot

Ac st spé (st dirigé ct Ag) 🡪 Ac ligand & ag récepteur.

Enzyme c une prot qui est un récepteur qui va intéragir ac son ligand = le substrat 🡪 on peut mesurer autre chose en plus : la vitesse de catalyse car enz est un catalyseur

Ligand peut avr un ou pls site de fixation sur récepteurs. Si on en a pls ils seront indépendant. Ici on va considérer que chaq site fixe le ligand ac la mê affinité.

Expérience pour mesurer intération : dialyse à l’équilibre 🡪 on prend 2 compartiment : récepteur ®d’une part (compartiment A) & ligand (L) d’une part (compariment B, on connaît la quantité de ligand total

Memb de dialyse sélective 🡪 que ligand qui peut diffuser

Au bout d’un moment diffusion du ligand vers compartiment A & vont se fixer sur récepteur. On attend l’équilibre (aucun mouvemt) 🡪 saturation d récepteurs.

A l’équilibre on mesure : [L](A),libre = [L]B,libre

[RL] = [L]totale – [L]libre    (RL = récepteur lié)

[L]tot = [L] + [RL]

On peut mathématiser cette intéraction

(Regarder feuille)

               II) Introduction aux enzymes 

                    2) Enzyme et cofacteurs

Il y a d enz qui nécessites ps de cofacteurs pour faire transformation.

Acyl-CoA 🡪 transporteur de substrat jusqu’à enzyme. Transporte chaîne acyl

Déshydrogénation 🡪 NADH + H+

Zn2+ 🡪 pour stabiliser enz elle mê pour la catalyse. Carboxypeptidases = protéases

                     3) Energie d’activation

Saccharose ds intestin va ê digéré en glucose + fructose. Enz qui hydrolyse saccharose = saccharase.

Saccha peut ê hydrolysé d’une façon nn enzymatiq, c juste une question de tps. A un moment thermodynamiquement il va se briser en 2. Il faut hydrolyser pr accélérer syst.

Chaq corps contient une nrj potentiel. Cette nrj là va ê transformée d’un corps à un autre (d’une situation à une autre).

G pour Gips.

Au début va ê activé pour atteindre un niveau très élevé (saut énergétiq) puis réaction va ê transformé. Variation d’nrj à la fin va ê négative (50-100 = -50).

Réaction spontanée ; toute réaction va se produire cô ça (spontanée mê qd ps d’enz)

Réaction exergonique = libération de chaleur, d’nrj.

Nrj utilisable directe & pour la synthèse de molécules organiq.

Enz va accélérer la réaction. Enzyme diminue énergie d’activation du syst

                       4) Nomenclature et classification d enz

              III) Cinétique chimiq

Qui dit catalyse dit vitesse de réaction. Mesure quantité de produit qui apparait/unité de tps.

Catalyse chimiq = utilisation de catalyseur chimiq

1. Notion de vitesse

Expression de la vitesse d’une réaction :

S 🡪 P (sur la fléche : k1 = constante de vitesse)

V = -d[S]/dt     (variation de [substrat] / unité de temps)

V = d[P]/dt      (si on exprime en fonction du produit, pas de – car il apparaît)

Donc V = -d[S]/dt = d[P]/dt = k1[S]

Ça c’est pour réaction irréversible

Pour réaction réversible :

S          P (k1 ou k-1)[pic 1]

V = -d[S]/dt = d[P]/dt = k1[S] – (k-1)[P]

A l’équilibre, [P]éq/[S]éq = k1/k-1 = K (constante d’équilibre)

Vitesse de réaction : variation de [c] / unité de temps

• [c].t-1 (M.min-1…)

[pic 2]

[S]0 est une constante

1. Ordre de réaction

+ on met de substrat, + la vitesse de réaction augmente

• Ordre de réaction : dépend de la nature de la relation entre la vitesse de réaction et la [c] d’un des réactifs ds des conditions définies

Réaction d’ordre 0 :

• La vitesse est indépendante de la [c] en substrat (tous les sites de fixations de substrat sur enz sont saturés)
• Dans ce cas, la vitesse de réaction dépends de la [c] en catalyseur et/ou de divers facteurs autres que la [c] d réactifs impliqués

V = -d[S] / dt = k = constante de vitesse d’ordre 0, exprimé en [].t-1 cô pr la vitesse

Réaction d’ordre 1 : La vitesse de réaction est directemt proportionnelle à la [c] de substrat

V = -d[S]/dt = d[P]/dt = k[S], k exprimé en t-1 (s-1 ou min-1)

Ordre d’une réaction :

[pic 3]

                       IV) Cinétique enzymatique

1. Modèles de base de la cinétique enzymatique

Dès 1902 avec Victor Henri & Adrian Brown

Expérimentalmt ils ont mesuré la quantité de produit par unité de tps

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