Compte rendu de biotechnologie

TP1 Biotechnologie

Phytohormones et organogenèse / culture in vitro[pic 2]

AILLAUD Morgane

SENGENES Amélie - AGRO2

Introduction

        Dans le cadre de notre année de DUT, nous avons réalisé un TP sur les rôles des phytohormones dans l’organogénèse, en culture in vitro.  Le TP sera réalisé en deux parties, lors d’une première partie nous avons préparé les milieux de cultures (Murashig et Shoog, et Gambord). Dans une deuxème partie nous avons mis en culture les tissus végétaux en conditions stériles. Les tissus utilisés sont la carotte, la pomme de terre et le saint Paulia.

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De nos jours, il est possible, grâce à la culture in vitro, de créer et de développer des centaines de plantes à partir d’un seul tissu. Le matériel végétal utilisé pour ce type de culture est appelé explant et il faut que celui-ci soit basé sur la propriété de totipotence, c’est-à-dire que toute les cellules végétales doivent être capable de régénéré un autre individu identique à celui dont elles sont issues. La culture in vitro est un outil qui permet d’améliorer les caractéristiques des plantes mais aussi assainir les variétés. De plus, elle a différent intérêt, comme par exemple de production ou encore de conservations des espèces. Mais aussi une importance agronomique par rapport à la création de nouvelles espèces.

Ainsi, pour réaliser une culture in-vitro, il faut partir d’un explant avec une structure organisée tel que par exemple des bourgeons, des nœuds, méristèmes… Ou de tissus différencié (racine, feuille, tige…) prélevé sur un pied mère.

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Lorsque nous partons des ébauches de structure, nous obtenons la caulogénèse et la phylogénèse (après être passé dans un milieu hormonal spécifique). Lorsque nous partons d’un tissus différencié il faut d’abord qu’ils se dédifférencies (callogénèse).

Pour cultiver des explants in vitro, il est faut de fournir un milieu ayant tous les éléments chimiques nécessaires à leurs développement (carbne,azote, oligoéléments, vitamines, régulateurs de croissance…). Cependant, ce milieu nutritif est également favorable au développemnt des microorganismes. C’est pourquoi, il convient de faire nos cultures en conditions stérile c’est-à-dire exempt de tout microorganisme.

Dans ce TP, nous avons réalisé 8 cultures in vitro afin d’observer le développement de différent explant. Avec les expériences que nous faisons, nous pouvons poser la problématique de l’influence des phytohormones sur le développement des plantes. Nous allons tenter de comprendre le rôle des phytohormones dans la différentiation cellulaire avec les expériences qui seront décrites dans tout ce rapport.

1. Phytohormones et différentiation cellulaire

Nous avons dans un premier temps réalisé des solutions avec différentes concentration de phytohormones afin de faire la culture de bourgeons  des pommes de terre (explant) et voir l’effet des phytohormones sur la croissance :

Tableau 1 : concentration en phytohormones de chaque milieu

B) Culture in vitro St Paulia, carotte et pomme de terre

Ensuite, il a fallu préparer des cultures in vitro de St Paulia, carotte et pomme de terre afin de faire une callogenèse puis une micropropagation et enfin, un enracinement. Nous n’avons pas pu finir cette étape à cause de l’arrêt du phytotron pendant la durée d’incubation de nos cultures. Voici donc le tableau qui résume ce que nous avons pu réaliser :

Tableau 2 : concentrations en phytohormones des tubes C1, S1 et P6

Protocole expérimental

I) Préparation et stérilisation des milieux de culture

• Milieu MS : P1 à P5 (2 tubes de chaque), S1 (3 tubes) et P6 (3 tubes)

• Milieu G : C1 (3 tubes)

Tableau 3 Tableau des compositions des milieux

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