CR TP hémolyse

DURAND Charlotte RAFFEAU Sylvain

L2 Sciences de la Vie Série A Groupe E1

HLBI404

PHYSIOLOGIE DES GRANDES FONCTIONS

TP 1 : Hémolyse

Introduction :

Le sang est un lieu d’échanges et de communication permanent entre les cellules, tissus et organes. Grâce aux hématies, il permet également le transport de dioxygène et de dioxyde de carbone entre l’environnement extérieur et l’organisme. Ces hématies ont donc un rôle primordial dans le fonctionnement de l’organisme. Ainsi, il est très important que l’équilibre osmotique soit maintenue dans ces cellules. Dans le cas ou cet équilibre serait rompu, une hémolyse pourrait être provoquée. L’hémolyse d’un grand nombre d’hématies dans l’organisme aboutirait sur une anémie hémolytique. Comment se comportent alors les hématies dans des conditions osmolaires différentes ? Pour répondre à cette question, nous allons expérimenter l’effet de solutions d’osmolarité différentes ou dans des conditions de même osmolarité mais de composition chimique différente.

Matériels et méthodes :

Pour cette expérimentation, nous avons utilisé des hématies de rat en suspension dans du sérum physiologique stérile.

Nous avons préparé plusieurs solutions de chlorure de sodium (NaCl) de 8 mL à des concentrations différentes (3‰, 6‰ et 9‰) à partir d’une solution à 12‰. Pour préparer la solution à 3‰, nous avons prélever 2 mL de NaCl 12‰ à l’aide d’une pipette graduée que nous avons ajouté à 6 mL d’eau distillée (dilution au ¼) dans un tube à essai. Pour préparer la solution à 6‰, nous avons prélevé 4 mL de NaCl 12‰ QSP 4 mL d’eau distillée. Pour préparer la solution à 9‰, nous avons prélevé 6 mL de NaCl 12‰ QSP 8 mL.

Nous avons ensuite préparé huit tubes à hémolyse avec 0,5 mL de solution à tester : un tube contenant du sérum physiologique (témoin), quatre tubes pour les différentes solutions de NaCl 3‰ à 12‰, un tube contenant du glucose à 5,5%, un tube contenant de l’urée iso osmotique au plasma et un tube de glycérol iso osmotique au plasma. Dans chacun de ces tubes, une goutte d’hématies à été ajoutée. Nous avons ensuite observé dans quels tubes il y avait eu hémolyse. Une attente d’environ 30 minutes pour le tube de glycérol est nécessaire.

Pour chaque tube, une goutte a été placée entre lame et lamelle pour une observation

microscopique à l’objectif 40.

Tous les tubes ont ensuite été centrifugés 10 minutes à 3000 tout/minute afin d’observer si l’hémolyse avait bien eu lieu.

Résultats :

Dans les tubes 1, 4 et 6, on observe un trouble avant centrifugation, et un culot rouge et un surnageant transparent après centrifugation. Au microscope, les hématies sont rondes, biconcaves et de taille normale.

Dans les tubes 2, 7 et 8, avant centrifugation, on observe que la suspension est limpide. Après centrifugation, il n’y a pas de culot et le surnageant est rouge. Au microscope, on observe uniquement des fantômes d’hématies.

Dans le tube 3, la suspension est trouble avant centrifugation. Après centrifugation, on observe un petit culot et un surnageant rosé. L’observation microscopique montre des hématies totalement rondes et de grande taille.

Dans le tube 5, la suspension est trouble avant centrifugation et on obtient un culot rouge et un surnageant transparent après centrifugation. Au microscope, les cellules sont petites et crénelées.

Discussion : analyse et interprétation des résultats :

Nous savons que l’osmolarité du plasma est équivalente à l’osmolarité du milieu intérieur des

hématies.

Sachant que la norme physiologique du plasma comprend du NaCl à 9‰, l’osmolarité du NaCl

9‰ est égale à l’osmolarité du plasma, soit entre 300-310 mosmol/L.

Tube 1 :

La solution dans le tube correspond au sérum physiologique, c’est-à-dire au milieu extérieur reconstitué artificiellement des hématies.

Les aspects macroscopiques : solution trouble avec surnageant transparent et culot rouge signifie que tous les globules rouges sont au fond du tube et n’ont pas explosé, ce qui nous permet de dire qu’il n’y a pas eu d’hémolyse.

L’osmolarité et la tonicité sont isoosmotique et isotonique, signifiant que les échanges d’eau

entre la solution (milieu extérieur) et les hématies (milieu intérieur) sont égales.

Il n’y a donc pas eu hémolyse ou plasmolyse.

Le tube 4 à NaCl 9‰ a donc les mêmes conclusions car c’est la concentration physiologique d’un plasma.

Tube 2 :

La solution présente dans le tube est une solution à NaCl 3‰, les observations

macroscopiques montrent un sang laqué indiquant que les cellules sont éclatées.

Il y a donc eu un échange d’eau entre les 2 milieux.

L’osmolarité de la solution est inférieure à l’osmolarité de la cellule, ce qui signifie que la concentration en sel NaCl 3‰ est hypoosmotique à la concentration en sel dans les hématies

L’eau est rentrée abondamment dans les cellules, jusqu’à leur hémolyse totale, ce qui libère les molécules d’hémoglobine dans le milieu extérieur, expliquant l’aspect rouge du liquide contenu dans le tube.

Tube 3 :

Le tube contient une solution de NaCl 6‰, ce milieu est hypoosmotique par rapport aux

cellules.

Il devrait y avoir un phénomène d’hémolyse, cependant on peut observer en microscopie des cellules de grandes tailles et turgescentes ainsi qu’un surnageant rosé mais un culot toujours présent. On n’est donc pas en situation normale, mais on a une hémolyse partielle.

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