Extraction Des Lipides Du Jaune D'oeuf

EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’OEUF

MATERIEL PRODUITS

- 2 cuves de chromatographie

- 2 plaques de gel de silice

- 1 éprouvette de 20 mL

- 1 petit bécher pour la pesée

- 1 erlen de 50 mL

- 1 pipette de 0,2 mL

- 3 pipettes de 1 mL

- 1 pipette de 2 mL

- 1 pipette plastique

- 2 tubes à hémolyse

- capillaires

- vortex

- hotte aspirante

- propipette

Jaune d’oeuf lyophilisé

Témoins lipides préparés dans le chloroforme :

Triacylglycérol 5 mg.mL-1

1,3-Diacylglycérol 5 mg.mL-1

1,2-Diacylglycérol 5 mg.mL-1

Monoacylglycérol 10 mg.mL-1

Acide gras 10 mg.mL-1

Cholestérol 5 mg.mL-1

Ester de cholestérol 5 mg.mL-1

Phosphatidylcholine 5 mg.mL-1

Phosphatidyléthanolamine 5 mg.mL-1

Solvants

Solvant d’extraction : chloroforme/méthanol (2:1, v/v/v)

Solvants de chromatographie : hexane/éther diéthylique/acide acétique (70:30:1, v/v/v)

dichlorométhane/méthanol/eau (65:25:3, v/v/v)

Révélation des lipides

Coloration par le bleu de Coomassie G250 300 mg.L-1 dans NaCl 3,5 g.L-1 méthanol 20 %

puis décoloration par NaCl 3,5 g.L-1 méthanol 20 %

Le but du TP est de séparer et de caractériser les principaux constituants lipidiques du jaune

d’oeuf. L’extraction des lipides et leur séparation des autres molécules biologiques reposent sur leur

différence de solubilité, les lipides étant solubles dans les solvants organiques. Une fois extraits, les

constituants lipidiques du jaune d’oeuf sont caractérisés par chromatographie sur couche mince en

comparant leur migration à celle de lipides témoins.

1. EXTRACTION DES LIPIDES DU JAUNE D’OEUF

- Dans un tube à essai, peser environ 50 mg de jaune d’oeuf lyophilisé.

- Préparer, dans un 2ème tube à essai, le mélange chloroforme/méthanol (2:1), boucher le tube à

essai par une feuille adhésive de PARAFILM®, mélanger au Vortex (agitateur type Vortex).

- Ajouter 1 mL de ce mélange à la poudre de jaune d’oeuf, boucher le tube, agiter 30 secondes

au Vortex, laisser décanter. Le contenu du surnageant est

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