Préparation de la caséine

La caseine préparation des caséines, détermination de sa concentration, analyse d'acides aminés constitutifs

Résumé

Le lait contient de nombreuses protéines. Le but de ce TP est d'étudier l'une d'entre elles : la caséine. Pour cela, différentes techniques de biochimie sont utilisées, en particulier, ici, la précipitation isoélectrique, le dosage ou encore la chromatographie de partage afin d'identifier les acides aminés la composant.

Introduction

La caséine est une protéine lente dont l'assimilation se fait en huit heures et libère donc des acides aminés durant cette période. Grâce à différentes étapes, la composition en acides aminés de la caséine va être déterminée. En effet, il faut tout d'abord isoler la protéine des autres constituants afin d'effectuer une précipitation isoélectrique. Ensuite, au moyen d'un dosage calorimétrique, ses molécules sont quantifiées, en particulier ici la tyrosine.qui est un acide aminé aromatiques, polaire et donc hydrophobe.

On la quantifie donc dans une préparation pour déterminer la concentration en caséines à partir de la quantité de tyrosine constitutive. Et enfin, nous avons séparés les acides aminés provenant d'hydrolysat des caséines par chromatographie de partage

Matériel et Méthodes

Toute les protéines ont un point isoélectrique. On utilise cette propriété pour séparer les caséines. Le principe de cette technique est le suivant :

-abaisser le pH du lait à 4,6 qui est le pHi moyen des caséines, à ce pH les caséines vont précipiter. -Puis nous récoltons le précipite par centrifugation et le laver à l'éthanol pour éliminer les molécules d'eau et le faire sécher.

-20 mL de lait écrémé a été mesuré avec une éprouvette et verser dans un bécher.

on a laisser reposer sur la paillasse 5 min.

le mélange a été centrifugé 10 min à 10°C à 4000tr/min dans un tube falcon.

Le tube a été laissé sur la paillasse afin qu il s’égoutte

10 ml d'ethanol ont été ajoutés et le précipité a été remis en suspension.

Le tube a été centrifugé à 4 min à 4000tr/min. Le surnageant a été jeté et l'eau éliminé.

Le surnageant a été jeté et l'eau éliminé. 10 mL d'éthanol 95%, le précipité a été remis en suspension puis a été centrifugé 5 min à 4000tr/min. Le surnageant a été jeté et le reste mis a égoutté. Le précipité a été récupérer sur un morceau d'aluminium et laisser sécher jusqu’au lendemain sur la paillasse. Le culot a été pesé après séchage et le rendement de notre préparation en comparant à la composition du lait donnée sur les bouteilles commerciales a été calculé.

Pour déterminer la concentration en protéine d'une solution on peut doser la quantité d'un acide aminé constitutif, la tyrosine libre en est un facile à doser. Le nombre de tyrosine libre dans l'échantillon

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