Effet Du Ph Sur l'activité Enzymatique (biochimie)

Condition opératoire :

 Enzyme PAL (phosphatase alcaline) 0,02 U/ML dans MR

 Substrat PNPP à 20 mmol/L

 Pipette num 6

 Spectro num 1

 Potentiomètre Denver instrument model 215

 Tampon glycine (9,3 mmol/L) pH=10,4 (utiliser pour réaliser pH 9,5/10/10,4/10,6/11/11,5)

 Tampon acide borique/borate (0,1 mmol/L) pH=8 (utiliser pour réaliser pH 8 / 8,5 /9)

 Tampon tris (0,1 mmol/L) pH=7 (utiliser pour réaliser pH 7 / 7,5)

 Solution étalon ph 4 : HI5004 lot 6846

 Solution étalon ph 7 : HI5007 lot 6833

 Utilisation de NaOH à 2mol/L

 Temps d’incubation 5min

 Température d’incubation et de travail : 37°C

 Temps de réaction 30 secondes

 Lecture au spectro à 405 nm

Réalisation de la gamme de ph :

Afin de réaliser la gamme de ph on utilise trois tampons avec des ph différent auquel on ajoute plus ou moins de NaOH pour faire augmenter le ph celons la valeur voulue.

Tampon utilisé

glycine Acide borate/borique tris

Ph voulu

9,5/10/10,4/10,6/11/11,5 8 / 8,5 /9 7 / 7,5

Sécurité :

Pas de danger particulier pour les tampons, réactif et enzymes utilisé, nous appliquons néanmoins les bonnes pratiques de laboratoire (blouse et cheveux attaché et nettoyage du plan de travail).

Résultats expérimentaux :

Tampon (à différent ph) ajouté au MR en µL 900

Volume de PNPP en µL 50

Volume d’enzyme en µL 50

Ph 7,05 7,5 7,9 8 ,51 9,01 9,6

Pente moyenne 0,00173 0,002722 0,002397 0,002295 0 ,002725 0,004034

Ph 9,95 10,3 10,7 11,01 11,57

Pente

moyenne 0,005639 0,005102 0,005485 0,003245 0,001881

On peut voir sur la courbe que l’activité enzymatique est à son apogée aux alentour d’un ph de 10 à 11.

Car l’enzyme phosphatase alcaline fonctionne mieux aux ph alcalins et possède une activité maximum de 10,4 environ.

Le ph a donc bien une influence sur l’activité d’une enzyme.

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