Analyse d’Histamine

Analyse d’Histamine

1 – Objet :

Cette instruction décrit la détermination du mode opératoire du dosage de l’Histamine.

2 – Domaine d’application :

Cette instruction est applicable pour déterminer la teneur de l’histamine dans les poissons par méthode fluorimètrique .

3- Documents de référence :

Métode fluorimétrique de LERK ET BEL ( 1978)

4- Contenu

4-1 Principe :

Extraction de l’histamine par une solution d’acide trichloracétique par chromatographie sur colonne échangeuse d’ions et élution par l’acide chlorhydrique .Dosage par fluorimétrie après après complexation par l’orthophataldéhyde (OPA).

4-2 Appareillage et conditions analytiques

Matériel courant de laboratoire et , en particulier , ce qui suit .

• Colonne de purification en verre de 150 ×9 mm munie d’un robinet et d’un réservoir de 100 à 250ml.
• Spéctrofluorimètre ( λexcitation =360nm ; λémission = 450nm )
• Hachoir à viande
• Mixeur
• Chronomètre
• Becher
• Fiole
• Balance analytique , précise à 0.001g près .
•  Nacelle en plastique
• Tube à essai
• Agitateur vortex
• Gants
• Erlenmeyer
• Pipette
• Support statif
• Agitateur magnétique
• Barreau aimanté
• Pissette
• Entonnoir

4-3 Réactifs

Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue .

• Solution d’acide trichloroacétique 10% ( 10g dans 100 ml d’eau distillé )
• Résine ambérlite CG type 1 ( 100à 200 mesh ) .
• Solution tampon 0.2 M à ph = 4.62

• ( Dissoudre 27.2 g d’acétate de sodium CH3COONa3H2O dans quelque ml d’eau distillé et on ajoute 11.4 ml d’acide acétique et on complète à 2 litres avec l’eau distillé . Le PH est ajusté à 4.62 en ajoutant quelques gouttes de CH3COOH ou CH3COOHNa3H2O) ;
• Acide chlorhydrique 0.2 N ;

      ●    Acide chlorhydrique 0.7N ;

      ●    Acide chlorhydrique 0.1N ;

      ●    Hydroxyde de sodium 1N

      ●    Orthophtalaldéhyde (OPA) 1% (1g dans 100ml dans le MetOH) ;

      ●    Solution d’histamine 1g/L (1000ml/kg) ;

• Dissoudre 0.1g d’histamine dans 100 ml de HCI 0.1 N ou 0.1656 g  de chlorhydrate d’histamine). Cette solution étalon reste stable pendant plusieurs semaines au réfrigérateur.

4-4 Préparation des échantillons

Préparer l’échantillon conformément au règlement CE N° 2073/2005, annexe 1 et le plan d’échantillonnage frais de la norme NM 08.7.000 qui consiste à prélever neuf échantillons pour chaque lot.

5- Mode opératoire :

5-1 Extraction de l’histamine

On hache soigneusement l’échantillon représentatif de poisson (5g) + 45 ml de TCA (10%) +homogénéisation par un mixeur rapide + filtration

On prend 0.2 ml de cet extrait puis on lui ajoute 20 ml de la solution Tampon ( ph = 4.62).

5-2 Purification ( isolement de l’histamine ) :

La solution est ensuite chromatographie par une colonne remplie de résine échangeuse d’ions selon le mode suivant :

L’élimination des substances non fixées par l’ajout de 100 ml du tampon . Les amines retenues par la résine, sont élués par l’ajout de 20 ml du HCL ( 0.2N).

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