Etudes statistiques de la pousse de lentilles

Annexe :

Questions :

1. Le solvant de la phase mobile doit être polaire comme l’eau ou l’acétonitrile et posséder des ions compensateurs.
2. Le gradient suit une courbe linéaire, ce qui permet de déterminer une équation affine suivant le pourcentage de solvant B :

y= Ax + B avec x, le temps en minute et y le pourcentage de solvant B

On sait que à t=0, y=5 et que à t=12, y=30. On peut donc déterminer le coefficient directeur A tel que :                 A=[pic 1]

         donc    A=[pic 2]

= 2,08

On obtient donc y=2,08x+B. On cherche maintenant l’ordonnée à l’origine :

B=y – 2,08x , on se place à t=12 donc x=12 et y=30

Donc [pic 3]

Alors on a : [pic 4]

Maintenant pour nos peptides on trouve :

Pour le peptide non-digéré, on a un temps de t=9,2.

Donc on met dans l’équation : [pic 5]

On a donc 24,71% de solvant B pour les peptides non digérés.

Pour le premier peptide digéré on obtient [pic 6]

pour un temps t=5min.

Et enfin pour le deuxième peptide, [pic 7]

pour un temps t=7,1min

1. L’injection dans l’injecteur rhéodyne doit être méticuleuse. En effet, il ne faut pas déchets ou de bulles d’air qui pourrait gêner l’acquisition et surtout endommager l’appareil HPLC. Pour cela, il faut au préalable penser à filtrer notre solution pour éviter de boucher le tuyau. Ensuite avec notre aiguille, il faut prélever du solvant tout en évitant les bulles d’air afin de nettoyer la boucle d’acquisition. Une fois la boucle rincée, prélever la solution à analyser avec l’aiguille et insérer la dans le port prévu toujours sur la position LOAD de l’injecteur. Appuyer sur l’aiguille pour mettre la solution dans la boucle d’injection. Une fois tout injecté passer sur la position INJ tout en activant le programme.

                                               [pic 8]

1. Les traitements sur le gel d’héparine-sépharose permettent dans un premier temps de mettre le gel dans des conditions physiologique grâce au tampon à 1M de NaCl et par la suite d’éliminer les interactions non-spécifiques.

AVELRSPGISRF       RRKIAKRSIKTLEHKRENAKE

Acide aminé hydrophobe

Site de coupure de l’α-chimotripsine 

On peut voir que le fragment 1 possède 7 acides aminés hydrophobes alors que le fragment 2 n’en possède que 5. Par conséquent le fragment 1 aura un temps de rétention plus grand que celui du fragment 2 car comme il est hydrophobe il sera donc plus retenu par la phase stationnaire.

Résultat :

1er : Courbe blanche : On voit un pic négatif qui correspond au pic d’injection correspondant à l’écart entre le temps de changer l’injecteur de mode et d’appuyer sur le début du programme. Sinon il n’y a pas de pic comme prévu car il y a seulement du solvant ce qui n’absorbe pas de lumière.

2 : peptide non digéré : on observe un pic négatif sur la première minute d’acquisition et un pic positif au bout de 9,2 minutes. Le premier pic correspond encore au pic d’injection. Le deuxième lui correspond au peptide non digéré qui absorbe les UV de 214 nm.

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