Compte rendu Hémolyse

Compte rendu de Travaux Pratiques de Physiologie des grandes fonctions.

TP 1 : Hémolyse.

Introduction.

Les cellules des êtres vivants sont un lieu d'échange d’eau ou de substances dissoutes, échanges se faisant grâce à la perméabilité membranaire. Ils se font du milieu le moins concentré vers le plus concentré, grâce à une force appelée osmose ou pression osmotique.

Le but de ce TP d’hémolyse est étudier le comportement d’hématies de rat, en présence de solutions d’osmolarité différentes, ou bien  de solutions de même osmolarité, mais de composants chimiques différents. L’intérêt est de comprendre les différents phénomènes observés lors des expériences, et ainsi de mettre en avant les notions d’isoosmolarité, d'isotonicité d’une solution. (et de résistance globulaire)

Manipulations.

On a étudie le comportement des hématies de rat en présence de solution d’osmolarité différentes ou des solutions de même osmolarité mais de composants chimiques différents. Les solutés utilisés sont initialement présent dans le sang.  Nous allons identifier les phénomènes osmotiques liés à ces solutions, et ainsi comprendre le comportement des hématies dans ces solutions.

Pour se faire, il a fallu préparer plusieurs solutions de NaCl à différentes concentrations avec une solution mère de 12‰. Soit les dilutions suivantes :

Solution de NaCl à 9 ‰ = 6 ml de solution à 12 ‰ + 2 ml d’eau distillée

Solution de NaCl à 6 ‰ = 4 ml de solution à 12 ‰+ 4 ml d’eau distillée

Solution de NaCl à 3 ‰ = 2 ml de solution à 12 ‰ + 6 ml d’eau distillée

[pic 1]

Les résultats des observations macroscopiques et microscopiques se trouvent dans le tableau récapitulatif en fin de compte rendu.

Calculs des concentrations.

Exemples de calcul :

• Avec NaCl 3 ‰ : soit la formule suivante : OSM = (C/M) x n, ou C correspond à la concentration massique de la solution (en g/L), M correspond à la masse molaire, et n correspond à la constante de dissociation des molécules.

On a alors OSM = (3/58,2) x 2 = 0,103 osm/L

• Avec Glucose 5,5% : On a une concentration de 5,5g pour 100mL de solution, soit 55g pour 1 L de cette même solution. De ce fait, OSM = (55/180) x 1 = 0,305 osm/L
• Avec l'urée : la concentration osmolaire est la même pour la solution de glycérol , d’urée et de NaCl à 9‰. De plus, la concentration osmolaire de NaCl à 9‰ est identique à la concentration osmolaire de l’urée. L’urée ne se dissocie pas dans l’eau, donc la concentration osmolaire est égale à la concentration molaire de l’urée. On a donc :

            [Urée]=C(urée)/M(urée) <==> C(urée)=[Urée]*M(urée)=0.308*62.02=18.5 g/l

Tableau des résultats obtenus à l'aide des calculs :

[pic 2]

Ensuite, calculons l'somolarité ainsi que la pression osmotique du plasma à 37°C (ainsi que les autres solutions). On sait, qui plus est, que la concentration osmolaire du plasma est la même que la concentration osmolaire de la solution de NaCl à 9‰. On utilise alors les données fournies ainsi que la Loi de Van't Hoff, qui est la suivante : Π= RTC

Π= pression osmotique.

R=constante des gaz parfaits.

T= température absolue en Kelvin.

C= concentration osmolaire de la solution en Osm/l.

Soit  Πplasma = R*T*C=0.082*310*0.308=7.85 atm.

Autres exemples : ΠNaCl 6‰ = 0.082*310*0,205= 5,23 atm.

                              ΠNaCl 12‰ = 0.082*310*0,410= 10,45 atm.

Tableau récapitulatif des résultats obtenus au cours du TP.

[pic 3][pic 4]

Analyse et interprétation des résultats.

Une analyse détaillée des 8 tubes correspondants sera faite au cours de l'inteprétation.

Tube 1° : La solution présente dans ce tube correspond au milieu extérieur artificiel des hématies de rat. D'après les observations macroscopiques et microscopiques (suspension trouble, puis surnageant claire et culot trouble), on peut en conclure qu'il n'y a pas eu hémolyse. De plus, la tonicité du sérum physiologique est isotonique,  c’est à dire que l’échange d’eau est le même entre la solution (milieu extérieur) et les hématies (milieu intérieur).

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