Unité Formant Colonie

Depuis 1991, en période estivale, de forts taux de mortalité ont été observés en France, parmi les

huîtres creuses, et ce, tant en milieu naturel qu’en écloserie.

Dans le cadre de l’étude des populations bactériennes associées aux éponges de mer, des laboratoires

cherchent à identifier et caractériser les bactéries symbiotiques des éponges et à mettre en évidence le

rôle éventuel de ces bactéries dans la production de substances naturelles à potentiel biotechnologique.

On souhaite ainsi mettre en évidence des activités antimicrobiennes qui permettraient de lutter contre

certains microorganismes pathogènes provoquant la mort des naissains d’huîtres (oeufs).

En vue d’une purification et d’une éventuelle utilisation biotechnologique , on dispose :

• d’une souche isolée à partir de naissains d’huître nécrosés : « MA+N° » et « MB+N° »

• de 3 extraits d’éponge (A, B et C) pour lesquels on cherche à déterminer :

- l’existence d’une éventuelle activité antimicrobienne dans deux extraits : « EXTRAIT A » et

« EXTRAIT B »

- l’efficacité antimicrobienne d’un troisième extrait : « EXTRAIT C »,

1) Identification d’une souche microbienne responsable de la mort de naissains d’huître

Une souche responsable de la nécrose de naissains d’huître a été isolée sur milieu Marine Agar

(« MA+n° ») et en bouillon liquide Marine Broth (« MB+n° »)dont la composition se trouve en annexe

1.

• Effectuer un examen macroscopique des colonies présentes sur le milieu Marine Agar. Justifier

dans le compte-rendu l’utilisation de ce milieu pour l’isolement des micro-organismes impliqués

dans la nécrose des oeufs.

• Réaliser les examens microscopiques de la souche. Montrer à un examinateur

• Effectuer le(s) test(s) d’orientation nécessaire(s) à l’identification de la bactérie. Montrer à un

examinateur

• Rédiger le compte-rendu (annexe 3) avant l’heure limite indiquée en début de séance.

• Ensemencer la galerie d’identification miniaturisée choisie et éventuellement les milieux

complémentaires permettant l’identification de la souche.

2) Caractérisation d’une activité anti-microbienne des extraits A et B

Au laboratoire, l’étude de l’activité antimicrobienne des extraits d’éponge est réalisée par méthode de

diffusion en milieu gélosé sur différentes souches tests :

- Staphylococcus aureus (ATTC 6538)

- Escherichia coli (ATTC 8739)

- Vibrio anguillarum (ATTC 19264)

- Vibrio splendidus (ATTC 33125)

Candida tropicalis (ATTC 20336)

Matériel et réactifs :

- culture de 18 heures de Staphylococcus aureus sensible à l’ampicilline en Mueller Hinton (« Ref »)

- 1 écouvillon stérile

- 1 tube à hémolyse contenant l’extrait A (« extrait A »)

- 1 tube à hémolyse contenant l’extrait B (« extrait B »)

- un flacon contenant 20 mL de Mueller Hinton (MH)

- 1 portoir contenant 4 semi-microcuves

- 10 tubes de 9 mL d’eau physiologique

- 6 tubes de 15 mL de gélose dénombrement en surfusion

- 6 grandes boîtes de Pétri stériles

- 1 Gélose Mueller-Hinton (MH) en grande boîte de Pétri

- 1 gélose Trypticase Soja (GTS) en grande boîte de Pétri

- 1 petite boîte de Pétri contenant 5 disques stériles de 6mm de diamètre

- 1 pipette automatique P20

- 1 petite boîte de Pétri contenant 3 cônes jaunes stériles

- 1 boîte de Pétri vide stérile

- 1 tube à hémolyse contenant 1 disque d’ampicilline

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