Lecture du milieu Hugh & Leifson

Lecture du milieu Hugh & Leifson

Recherche de la voie d’attaque du glucose

But

Cette technique permet la détermination du métabolisme oxydation ou fermentatif de la bactérie, autrement dit : dégrade-t-elle le glucose via le cycle de Krebs (= aussi appelé cycle de l’acide citrique par anglicisme, est une voie métabolique présente chez tous les organismes aérobies et dont la fonction première est d’oxyder les groupes acétyle, issus notamment de la dégradation des glucides, des graisses et des protéines.) ou utilise-t-elle une autre voie ? Elle permet de connaître la voie de dégradation du glucose c’est-à-dire son type métabolique.

Principe

Le métabolisme des bactéries est recherché dans les ressources de Hugh & Leifson auxquelles on ajoute du glucose. Régénération du milieu (le milieu a été stocké trop froid pour le gaz dissous dans le milieu puisse s’en échapper). Par conséquent, il présente un gradient de concentration en oxygène (la teneur en oxygène en surface est supérieure à la teneur en oxygène en profondeur). Les bactéries qui utilisent le glucose produisent de l’acide. Le produit acide est décrit par le changement de couleur du bleu de bromothymol, qui est un indicateur de couleur du pH contenu dans le milieu. A la fin de l’incubation, on observe le changement de couleur du milieu pour déterminer le typer d’oxyde ou de fermentation.

La composition du milieu Hugh & Leifson

- Tryptone (2g)

- Bleu de bromothymol (30mg)

- Chlorure de sodium (5g)

- Hydrogénophosphate de potassium (0,3g)

- Agar-agar (2,5g)

Mode opératoire

Nous utilisons une culture propre pour éviter des résultats déformés.

Régénérer à 100°C pendant 30 minutes en dévissant un petit peu le bouchon pour laisser l’air s’échapper.

Laisser refroidir le milieu jusqu’à ce qu’il durcisse (par exemple, gagner du temps avec un robinet d’eau froide).

Utiliser une pipette pasteur fermée pour ensemencer le tube à essai en fessant une piqure centrale profonde.

Viser partiellement le bouchon du tube pour laisser l’oxygène pénétrer dans le tube à essai.

Incuber à 37°C pendant 24 heures à 48 heures.

Lecture, interprétation  

[pic 1]

On observe aucun changement avant et après ensemencement donc on peut conclure que la souche de bactérie étudiée est inerte vis-à-vis du glucose. Le pH du milieu reste vert donc a un pH neutre (environ 7).

Conclusion

Lorsque les bactéries décomposent le glucose (et d’autres glucides) pour produire de l’énergie, il a soit la voie oxydative ou respiratoire : le glucose est totalement oxydé par le dioxygène de l’air, qui est donc indispensable à cette voie, les produits formés sont faiblement acides ou il a soit la voie fermentative ou fermentaire : le glucose est partiellement dégradé, le dioxygène de l’air n’intervient donc pas dans la dégradation du glucose, les produits formés sont caractéristiques de chaque type de fermentation et sont en général des acides qui provoqueront une baise importante du pH. Le type de métabolisme caractérise le comportement des bactéries donc. Ma souche est donc une souche indépendante du glucose vu qu’on observe aucun changement de couleur.

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