Isolement su sol

                      REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE [pic 1]

UNIVERSITE DES SCIENCES ET DE LA TECHNOLOGIE MOHAMED BOUDIAF-ORAN-

FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE

Département du Vivant et de l’Environnement

M1 Microbiologie Appliquée

Module : Ecologie des microorganismes

[pic 2]                                              Compte rendu n°=1

Réalise par :

• BENFRIHA       HOUARIA
• BENSKERANE     NAWEL
• Groupe : 02
• Section : 01

                                                                         Travail présenté à Mme Mermouri  

                                                                                   Donné le :  /02/2022                  

                                                  L’année universitaire : 2021l2022

                                         Introduction

En microbiologie, l’isolement est une technique permettant de séparer les microorganismes présents dans un mélange microbien. La technique de l’isolement présente deux applications :

• Dans le cadre d’un mélange bactérien, l’isolement est utilisé au préalable de l’étude du mélange. L’isolement permet ainsi de séparer les différents membres du mélange et de les étudier de façon séparée.
• Dans le cadre d’une culture pure (une seule espèce), cette technique permet de vérifier sa pureté.

But de TP : isolement des microorganismes à partir de différentes échantillons (le sol et l’eau de mer).

Les matériels:

Les matériels biologiques : Un échantillon de sol, Un échantillon d’eau de mer.

Les milieux de culture : la gélose Sabouraud, la gélose nutritive, BG11 liquide, BG11 solide ,

Boites de pétri, tubes à essai,  Erlenmeyer, micropipettes, pipette pasteur, embouts, marqueur,

Bec benzun, L’étuve, vortex, microscope, lame et lamelle, bleu méthylène,

Mode opératoire :

Avant commencer l’expérience:

• Allumer le bec bunsen avec le briquet (flamme bleu), et laisser un petit moment pour stériliser la zone.

1. l’échantillon de sol :

• Préparation de solution mère :

À laide d’un papier aluminium déposer 1 g de sol dans un tube à essai contenant 9 ml de l'eau physiologique. A l'aide d'un vortex, homogénéiser bien la solution. Le contenu du tube représente la solution mère.

• Préparation des dilutions décimales :

• On a réalisé des dilutions à partir de la solution mère. Trois tubes contiennent 9 ml d’eau

physiologique stérile préparées par l’enseignant, à l’aide d’une micropipette prendre 1 ml de la suspension mère et verser le dans le tube (10-1) , Flamber et refermer le tube .

• Puis on prélève 1ml de la dilution 10-1 puis mettre dans le tube n°2, on obtient la dilution (10-2)
• Il faut flamber les goulots des tubes après leur ouverture et avant leur fermeture.
•  pipeter 1 ml de la dilution (10-2) et verser dans le troisième tube « c’est le tube de dilution (10-3)

Remarque :

• Mélange soigneusement chacune des dilutions pendant 5 à 10 secondes à laide d’un vortex
•  Après chaque transfert on doit changer l’embout de la micropipette avec un autre de prélèvement de la suspension mère jusqu’à le dernier tube à essai.
• l'ensemencement : on utilise deux milieux de culture :

1. la gélose nutritive : 

• À l’aide d’une micropipette avec un embout stérile, Prendre un volume 0,1 ml de la dilution (10-1) et lui déposer à la surface du milieu de culture coulé et solidifié.
•  Constituer un râteau (étaloir) à l’aide d’une pipette Pasteur.
• Étaler la goutte de suspension par ce râteau.

1. le milieu sabouraud : (un milieu utilisée pour cultiver les mycètes)

• Prélever 0,1 ml à partir de la dilution (10-2) et déposer dans une boite de Pétri contenant La gélose sabouraud , puis étaler le prélèvement.

1. L’échantillon de l’eau de mer :

• La dilution : A l’aide d'une micropipette, prélever 1 ml de la solution mère puis transférer dans un tube à essai contenant 9 ml d’eau physiologique .Agiter, on obtient la dilution (10-1) .
• L’ensemencement : on utilise trois milieux de culture :

1. la gélose sabouraud : en prendre un volume de  0.1ml de la dilution (10-1) et en le mettre dans une boite de Pétri contenant le milieu sabouraud, ce volume étalé à l’aide d’une pipette râteau sur toute la surface de gélose.
2. le BG11 solide (un milieu utilisée pour cultiver les cyanobactéries) : on prélève 0,1 ml et on ensemence une boite de Pétri avec un milieu de culture (BG11 gélosé) puis on étale le prélèvement (0,1ml).
3. le BG11 liquide : prélever 1ml de la solution mère (L’eau de mer) et mettre le volume dans une Erlenmeyer contenant le milieu BG11 solide, puis homogénéiser la solution par l’agitation manuel.

• L’incubation : (le couvercle en bas) Incuber tous les boite de pétri et l’Erlenmeyer dans l’étuve  à une température 37°C pendant 24 à72 heures.
• Résultats et l’interprétation :

Lorsqu’on observer les boites de pétri après une semaine on a trouve que :

• les deux échantillons ayant une activité biologique mais le sol est le plus riche en microorganismes que l'eau de mer.
• Le sol contient

• Observation microscopique de l’eau de mer :

Le mode opératoire :

• prélever à la micropipette une goutte de l’eau de mer. La déposer sur une lame. Recouvrir d’une lamelle puis observer au microscope.

• Avec la coloration : prendre une autre goutte de le même échantillon et déposer la sur la lame, ajouter une goutte de bleu méthylène, ensuite recouvrir d’une  lamelle et examiner au microscope.

                                                  Conclusion

Les environnements extrêmes constituent un réservoir encore mal connu de biodiversité microbienne. Les souches isolées ont des potentialités élevées pour une utilisation en biotechnologie. L’étude de ces écosystèmes contribue très significative- ment à la compréhension des phénomènes à l’origine de la vie sur terre.

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