Compte Rendu TP Génétique Transposon

Compte Rendu de génétique

But :Criblage génétique de mutants létaux grâce à une mutagenèse insertionnelle d’un élément P.

Étape 1: mutagenèse insertionnelle

Croisement de ☿ de la souche 4 par des ♂ de la souche 7

La souche 7 : w-/w- ou Y ; Bal 2,P(m-w+),Cy/Sp ; +/+; +/+ => [rouge ; Cy ; Sp]

La souche 4 : w- / w-ou Y ;  +/+ ; TMS,Sb,P𝛥2-3/P𝛥2-3 ; +/+ => [blanc ; Sb]

Les marqueurs chromosomiques:

• Sb montre la présence du balancer 3 et donc de la transposase P(𝛥2-3).
• Cy montre la présence du balancer 2 et donc la présence de l’élément P.
• Mini white montre la présence de l’élémént P car il restaure le phénotype : yeux rouges.

L’utilisation des balancers permet de s’assurer qu’il n’y a pas de crossing-over.

La mutagenèse insertionnelle aura lieu si l’élément P et la transposase sont présents dans le génome, nous avons donc fait les croisements:

♀ 4 x ♂ 7

À partir de ces deux croisements, nous avons récupéré des ☿ et des ♂ [Big;Cy;Sb] .

La présence des deux phénotypes Cy et Sb indique la présence de la transposase et de l’élément P, donc il y a possibilité de transposition de l’élément P. Les yeux bigarrés nous confirment la transposition, car le gène mini white+ porté par l’élément P donne un phénotype rouge à la cellule s’il y a eu transposition.

Les yeux sont représentatifs de toutes les autres cellules de l’organisme et donc de la lignée germinale, les gamètes haploïdes de ces mouches peuvent être porteuses d’une transposition ou d’une excision. Ces événements seront visibles grâce au phénotype du prochain croisement.

Etudions la répartition des phénotypes à l’aide du test du X²

Soit H0 : fr obs = fr théorique

Sur un échantillon de 109 individus avec une fréquence théorique de 0,125 pour les 8 classes nous obtenons un nombre attendu d’individus par classe égal à 13,625.

X²=Σ((O-A)^2 / A) = 5,6

pour ddl=7 et  α = 0,05 on à X0,05= 14,067

5,6<14,067 on ne rejette pas H0 et on en déduit que le croisement ♀ 4 x ♂ 7 a une distribution normale des phénotypes en accord avec les lois de Mendel.

Etape 2 : Isoler des événements de transposition

☿ou ♂ [Big;Sb;Cy;Sp+] x ♂[blanc] (souche 2)

La souche white : w-/w- ou Y ; +/+; +/+; +/+

Transposition

• [Rge; Cy+ ;Sb+ ] n = 3

Les yeux rouges montrent la présence de l’élément P et l’absence de la transposase.

Cependant nous n’avons plus le chromosome bal2 qui portait l’élément P d’origine, montré par le phénotype [Cy+] il y a donc eu transposition. La présence de phénotype [Sb-], alors que ces groupes devraient être sans transposase, peut s’expliquer soit par la non-fiabilité de ce marqueur soit par une mauvaise lecture de notre part lors des comptages.

Excision

• [Bl; Cy ;Sb+/- ] n = 19

Les yeux blancs montrent l’absence d’élément P. Cependant nous avons toujours le phénotype Cy marqueur de bal 2 qui portait à l’origine l’élément P.

Cela nous montre que l’élément P a été excisé.

Les taux nous montrent que la transposition, un phénomène nécessitant l’excision et la transposition, est plus rare que l’excision qui nécessite seulement l’excision du génome. Ce qui est logique car un événement aléatoire aura plus de chances de se produire que deux.

...