Tp L'alcool Deshydrogenase

Binome : Ndombi nze et Biloghe Anne

Travaux pratique Métabolisme : Etude de l’alcool déshydrogénase

Dans ce TP nous étudions l’activité de l’alcool déshydrogénase de levure ;ces mécanismes réactionnel et quelques un de ses aspects structuraux et fonctio nnels. Elle intervient dans la détoxification de l’éthanol c’est une enzyme de la classe des oxydoréductase et est fonctionnel a ph 8,8 .

Réactif :

Solution de NADH à 2 mmol/L Solution d’éthanol 5 mol/L

Solution de NADP+ à 15 mmol/l Solution d’éthanol 10 mol/L

Solution de NAD+ à 0,5 mmol/l Solution 1-propanol 3mol/L

et à 15mmol/l Solution 1-propanol 3mol/L

Solution méthanol 3 mol/ Solution 2-propanol 3mol/L

Tampon glycine à pH 8 ,8 Solution d’éthanol 1mol/L

Solution d’éthanol 3 mol/L Solution 1-Butanol 3mol/L

Solution d’éthanol 7 mol/L Solution chloro- éthanol 3mol/L

I) Etalonnage

1.1Gamme étalon NADH

Calcul de la concentration final en NADH

Ci*Vi=Cf*Vf ===Cf =Ci*Vi/Vf ; Ci=2mmol/L ,Vi =0µL (tube1) ,Vf= 1000µL

Tube1 :Cf = 2*0/1000 = 0 mmol/L

Tube2 :Cf =2*20/1000 =0,04 mmol/L

DO 0 0,125 0,252 0,372 0,504 0,630

[NADH] 0 0 ,04 0,08 0,12 0,16 0,2

Courbe de l’absorbance en fonction de la concentration en NADH .

Détermination du coefficient d’instinction molaireε

1 .2)Gamme étalon NAD+

Calcule de la concentration finale en NAD+

Ci=0,5mmol/L ; Vi =0µl (tube1) , Vf=1000µL

Cf=Ci*Vi/Vf

Tube1 : Cf=0,5*0/1000 =0 mmol/L

Tube 2 : Cf=0,5*20/1000= 0,1 mmol/L

DO 0

[NAD+] 0 0,1 0,02 0,03 0,04 0,05

Courbe de l’absorbance en fonction de la concentration en NAD+

II) Activité de l’ADH en fonction de la concentration en éthanol

*Calcul de la concentration s finale en éthanol :

Tube2 :Cf =Ci*Vi/Vf =0,05*1/1,1=0,045moL/L

Tube 4 : Cf= 3*0 ,05/1,1=0,136 mol/L

Tube 6 :Cf=5*0,05/1 ,1=0 ,227mol/L

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