Règlages des spectrophotomètres

Spectrophotométrie

Règlages des spectrophotomètres

Spectronic 20

- zéro électrique en mode transmission avec un porte cuve vide, régler la valeur affichée à 0 avec le bouton de

gauche. Ce réglage effectué en début de séance reste valable quelle que soit la longueur d'onde de travail.

- zéro de DO en mode absorbance avec le tube témoin en place dans le porte-cuve, régler la valeur affichée à 0 avec

le bouton de droite. Ce réglage doit être effectué à chaque changement de la longueur d'onde de travail.

Spectronic Genesys 20

- zéro électrique ce réglage est effectué automatiquement par l’appareil au moment de sa mise en marche.

- zéro de DO en mode absorbance avec le tube témoin en place dans le porte-cuve, appuyer sur le bouton «0 ABS » .

La valeur affichée doit alors se stabiliser sur la valeur DO = O.

Loi de Beer Lambert

Les dosages colorimétriques s'appuient sur la loi de Beer Lambert qui indique que la densité optique (DO) ou absorbance d'un

produit en solution est proportionnelle à sa concentration DO = ε . c . l

ε : coefficient d'extinction molaire du produit coloré unité: M-1. cm-1

c : concentration molaire du produit coloré unité: M

l : longueur du trajet optique unité: cm

Dosages colorimétriques

La gamme d'étalonnage permet de réaliser un graphe où les DO sont exprimées en fonction de la quantité (et non de la

concentration) de produit par tube de gamme (en mg, µg, µmol ... selon le cas).

Les étapes de calculs sont les suivantes :

1- mesurer des DO des tubes « inconnus »

2- déterminer les quantités de produit à doser contenues dans ces tubes

3- calculer la concentration correspondante du produit dans 1ml de la solution inconnue contenue dans ces tubes.

4- Faire la moyenne des résultats obtenus pour un échantillon donné. Attention : vous ne pouvez faire la moyenne

que si les résultats obtenus sont proches (moins de 20% d’écart environ). Si les résultats divergent trop, il faut

les traiter séparément jusqu’au résultat final. On aura dans ce cas deux valeurs de concentrations pour un

échantillon.

5- Appliquer le cas échéant le facteur de dilution.

6- Exprimer le résultat final en utilisant l’unité demandée.

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