La biosynthèse des protéines

TP  la cellule et ses organites

Le rôle des organites dans la biosynthèse des protéines _                                

Une cellule réalise la synthèse de nombreuses protéines par assemblage d'acides aminés variés selon une séquence caractéristique sous le contrôle de l'information génétique qu'elle renferme.

Pour déterminer les organites cellulaires impliqués dans ce processus de biosynthèse des protéines, il faut repérer in situ les principaux acteurs de la biosynthèse dans l'ordre de leur entrée en action au sein de la cellule.

Pour y parvenir, des expériences d'autoradiographie et de marquage cellulaire à l'aide d'isotopes radioactifs ont été réalisées en particulier sur les cellules acineuses du pancréas.

Principe de la technique d'autoradiographie:

On prélève des tranches de pancréas de cobaye épaisses de 0,5 mm et on le met en culture. Pendant les 3 premières minutes, ces tranches sont mises en présence d'un acide aminé radioactif : la leucine tritiée (isotope 3H). Ce séjour en milieu radioactif est appelé "pulse". Ces coupes sont ensuite placées, pendant des temps variables, dans un milieu renfermant de la leucine non radioactive. À la fin de ce séjour appelé "chase", les tranches de pancréas sont fixées et débitées en coupes sur lesquelles la radioactivité est localisée par autoradiographie. http://svt.ac-creteil.fr/?Technique-d-autoradiographie.

1. Résultats obtenus avec l'uracile radioactive : le marqueur employé est un nucléotide : l'uracile tritié (isotope 3H) entrant dans la composition de l’ARN messager.

Lancer l'application "Biosynthèse protéique".

(NB : pour une meilleure lisibilité , les traces laissées par la radioactivité sont représentées en couleur)

Repérer et nommer les ultrastructures cellulaires dans desquelles la radioactivité se localise aux différents temps de l'expérience.

2) Résultats obtenus avec la leucine radioactive: le marqueur employé est un acide aminé : la leucine tritiée (isotope 3H) entrant dans la composition des protéines.

Repérer et nommer les ultrastructures cellulaires auprès desquelles la radioactivité se localise aux différents temps de l'expérience.

3) Résultats obtenus par marquage sur des fractions cellulaires

Après avoir homogénéisé des cellules au mixer, on les soumet à des centrifugations successives à vitesses de plus en plus élevées (g1, g2, g3) permettant ainsi de séparer progressivement des "fractions cellulaires" c'est à dire des ensembles d'organites cellulaires de plus en plus petits et légers jusqu'à un surnageant final dépourvu d'organites : le cytosol.

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