Immunofluorésence

Immunofluorésence :

Les embryons de Xénope sont fixé dans du méthanol et blanchie. Une fois cette étapes réalisé les embryons sont mis en présence de d’anticorps primaire anti-2g9 neurones et sont mis a l’incubation pendant une nuit a 4°C. Après cette incubation on va faire agir un anticorps secondaire qui est anti anticorps primaire et donc va le reconnaitre de façon spécifique. L’anticorps secondaire est couplé à un fluorophore Cy5 red-Far. La fluorescence sera visualisé grâce un microscope confocal cette technique permettra la visualisation in vivo des les conséquences du blocage l’acide rétinoïde par AGN (inhibiteur compétitif).

Résultats

(A)NT (contrôle).Comme on peut le constater les embryons de Xenopus incubées à 10-6 de M RA présentent une troncature antérieures. Les embryons incubés en 10-6M et 10-7 M AGN afficher une zone plus courte rhombencéphale et un œdème grand cœur avec le phénotype être plus sévère à 10-6 M. Lorsque les embryons sont incubés dans l'égalité concentrations (10-6 M) de la polyarthrite rhumatoïde et d'AGN, le phénotype qui en résulte est plus comme le phénotype AGN. Lorsque 10-6 M RA est combiné avec 10-7 M AGN le phénotype ressemble plus à un phénotype RA. L’Embryon de contrôle est l’embryon (B), comme on le remarque. Les embryons traités par AGN ont un nombre de rhombomères réduite à 4ou 5.

Ces résultats montrent qu’AGN bloque la signalisation des rétinoïdes in vivo. Les chercheurs ont montré que AGN peuvent inhiber les effets indésirable de RA (Fig. 1A). le traitement des embryons au stade gastrula avec 10-6 M de RA provoque une sévère troncatures, les yeux perdus ou réduits et une glande du ciment réduit .Cependant, l’action cumulé de 10-6 M de RA avec 10-6 M AGN maintien le développement normal de l'oeil

glande pigment et de ciment, semblable aux embryons traités avec AGN seulement, tandis que de la 10-7M AGN avec 10-6M RA a abouti un phénotype quasi normal. Ces résultats montrent qu’AGN peut inhiber la tératogénicité de RA. En outre, les traitements avec 10 -7M AGN ou 10-6M la seule cause de raccourcissement de plus en plus de l'axe Antéro Postérieur.

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