Électrophorèse

• SDS PAGE : Séparation des protéines en fonction de leur MM

→ Etude du gel à 10%

Nous observons seulement 3 bandes au niveau de l’échantillon M, (le tube 1). Nous pouvons quand même identifier les molécules mais nous ne pouvons pas faire de courbe de calibration. Les valeurs de distance de migration de l’échantillon M ne sont pas suffisantes pour en faire une.

Tableau de distance de migration du gel 10 % :

Echantillon du gel 10% M IgG (+) IgG (-) F1 F2 E2

Nombre de taches 3 taches 1 tache 2 taches 2 taches 2 taches 0 tache

Distance de migration 1.7 3.5 0.6 2.2 2.2 front

2.6 front 4.1 4.1

4.1 front front

front

(+) en présence de β-mercaptoéthanol et (-) en absence de β-mercaptoéthanol.

En effet, ce gel étant moins concentré les mailles sont plus grandes, par conséquent les protéines peuvent pénétrer facilement. La migration est rapide par rapport au gel à 15%. Les plus grosses protéines qui possèdent une faible distance de migration dans le gel 15% ont migré plus loin dans ce gel. De plus, les petites molécules ont tellement migré qu’elles sont sorties du gel.

Ainsi le profil de ce gel est une sorte de zoom de la partie supérieure du profil obtenu à 15%.

Etude de l’IgG : Dans ce gel, nous observons dans le dépôt 2 en présence de β-mercaptoéthanol, une grande bande à 3.5 cm ce qui peut correspond par déduction à la sous unité de l’IgG de PM d’environ 50kDa. Au front de migration, il doit y avoir une autre bande de PM plus légère. Elle n’apparait pas dû à la faible concentration du gel et à sa forte migration.

Dans le dépôt 3, nous observons une bande à 0.6 cm, celle-ci peut correspondre à l’IgG entier càd de 150 kDa (en théorie). Si on observe la bande à 1.7 cm du dépôt 1, la protéine correspondante a un PM d’environ 95 kDa. Or la bande du dépôt 3 est largement proche des puits cad que cette bande a beaucoup moins migré.

En E2, le front est très intense donc nous supposons que la bande correspondante au lysozyme a beaucoup migré en raison de son faible PM.

→Etude du gel à 15%

Tableau de distance de migration du gel 15%

Echantillon du gel 15% M IgG (+) IgG (-) F1 F2 E2

Nombre de taches 7 1 2 6 5 1

Distance de migration en cm 0.6 1.4 0.3 0.3 0.3 4.1

0.9 1.5 0.8 0.8

1.5 1.7 1.7

2.2 2 2.2

3.3 4.1

4.1

Nous utiliserons donc le gel à 15% pour déterminer le poids moléculaire de l’IgG.

Molécules Phosphorylase

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