TP acide nucléique

        TP3 : Extraction et purification des acides nucléiques de levure.

Introduction :

        L'extraction et la purification des acides nucléiques de levure ont pour but d'isoler une substance biochimique à l'état pur à partir d'un milieu naturel complexe dans lequel elle est en solution.

L'extraction est basée sur les solubilités réciproques de la substance à obtenir et celle à éliminer.

Il existe différents protocoles expérimentaux pour extraire les acides nucléiques qui suivent à peu près le même schéma de principe :

• Lyse des cellules
• Élimination des protéines et des lipides
• Récupération d'un acide nucléique donné

Pour extraire les acides nucléiques on va les séparer des autres composés présents dans le milieu, la centrifugation permet de séparer les molécules selon leurs poids moléculaire.

Ensuite on réalisera le spectre UV de notre solution finale, on établira le rapport de l'absorbance à 260 nm sur l'absorbance à 280 nm, si ce rapport est compris entre 1,8 et 2 alors notre solution d'acides nucléiques est pure, sinon c'est que nous avons encore différents composés.

ORGANIGRAMME :

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RESULTATS :

Pour commencer ce TP, nous devons préparer notre solution de levure. Pour cela dans un ballon on mélange, de la soude, notre levure émiettée et on dilue avec un peu d'eau distillée.

Ensuite on place le mélange à une température élevé pendant 30 minutes.

Ici l'augmentation de la chaleur permet de mettre en place une lyse cellulaire, si nous voulons récupérer les acides nucléiques présents dans les cellules de levure, il nous faut tout d'abord rompre les membranes plasmiques mais également nucléaires.

Une fois notre mélange chauffé, on le place dans la centrifugeuse, pour cela chaque binôme remplit un tube, les deux tubes doivent avoir un poids équivalent pour ne pas abîmer la centrifugeuse.

On récupère le surnageant et on se débarrasse du culot.

En effet, le NaOH instaure un pH basique, donc seuls les acides aminés acides et neutres des protéines ainsi que les glucides solubles et enfin les acides nucléiques seront présents dans le surnageant. Et donc les acides aminés basiques et les lipides hydrophobes se trouveront dans le culot.

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