Organigramme – TP « pH optimum »

ORGANIGRAMME – TP « pH optimum »

Préparation de la solution diluée d’iode au 1/100e - fiole jaugée de 50 mL

0,5 mL d’iode concentrée + eau désionisée 50 mL

Homogénéiser

* Préparation de la solution d’amidon à 25 g.L-1

0,25 g d’amidon de pomme de terre + 10 mL d’eau déionisée

Solubilisation par chauffage aux micro-ondes.

*A préparer après avoir mis le volume de tampon adéquat dans les tubes de la gamme étalon et dans le milieu réactionnel

Gamme étalon du dosage de l’amidon par l’iode

Tube 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

Tampon phosphatecitrate pH 7 (µL) 100 99 98 97 96 95 94 93 92 91 90

Amidon à 25 g.L-1 (µL) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Ajouter 1 mL de HCl 0,1 M

Prélever 100 µL de chaque tube transféré dans 1 mL d’iode diluée

Lecture A620 contre le tube de référence (tube 1)

Hydrolyse de l’amidon à différents pH

Tube 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Tampon (µL) 900 600 500 500 500 500 500 500 500

pH du tampon 7 7 3 4 5 6 7 8 9

Amidon à 25 g.L-1 (µL) 0 400 400 400 400 400 400 400 400

5 min à 30°C

a-amylase (µL)* 100 0 100 100 100 100 100 100 100

15 min à 30°C

Prélever 100 µL de chaque tube transféré dans 1mL de HCl O,1M

Prélever 100 µL de chaque tube précédent transféré dans 1mL d’iode diluée

Lecture A620 contre le tube de référence (tube 1)

*Décaler l’addition d’enzyme de 30 secondes entre chaque tube.

ORGANIGRAMME – TP« Cinétique enzymatique »

Dilution de la solution de phosphatase alcaline

Dilution au 1/200e : 7,5µL phosphate alcaline + 1,5mL tampon carbonate 0,1M pH 10 et homogénéiser

A partir de la solution précédente - Dilution au 1/800e : 0,5 mL + 1,5 mL tampon carbonate 0,1M pH 10 et homogénéiser

Conserver les solutions dans la glace

Influence de la concentration en enzyme sur la vitesse initiale de la réaction

Tube 1 2

Tampon (mL) 5,2mL 5,2mL

pNPP 0,2mL 0,2mL

Incuber 5 min à 30°C

*Enzyme (µL) (diluée au 1/800e) 600µL 0

*Enzyme (µL) (diluée au 1/200e) 0 600µL

Homogénéiser et incuber

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