Détermination de la composition d'un diholoside naturel par CPG

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Ayet Berradj

I. BUT :

II. PRINCIPES :

III. RESULTATS ET INTERPRETATIONS :

Avec les différents pics obtenus sur notre chromatogramme, nous allons pouvoir par comparaison des temps de rétentions avec notre témoin identifier les oses qui constituent notre diholoside. Nous pourrons ensuite déterminer les rendements de dérivation.

Identification des pics : les composées témoins sont élués dans cet ordre, d’abord l’acétate de Mannitol tr = 9,14 min, Acétate de galactitol tr = 10,06 min, acétate de glucitol tr = 11,17 min et acétate d’inositol tr = 12,36 min.  Annexe N°1.

En comparant notre essai aves nos témoins ont peut identifier 3 pic un correspondant au témoin interne : acétate de mannitol avec un tr = 9,1 min, et deux autres pics un avec un tr = 10,07 min correspondant à l’acétate de  galactitol et un autre pic avec un tr = 11,12 min correspondant à l’acétate de glucitol. On peut donc en déduire que notre diholoside est composé de 2 oses différents.

1) Calcule des temps de rétention relatif au mannose de chacun des composés.

Pour cette chromatographie le témoin interne choisi est l’acétate de mannitol, le temps de rétention (tr) d’un composé est constant par rapport à celui du témoin interne.

Pour calculer les temps de rétention relatif de chacun des composés par rapport au témoin interne, nous appliquerons la formule :   Tr/Tr Man = Temps de rétention du composé / Temps de rétention du Mannose

Chromatogramme 1 (tr) acétate de mannitol = 9,14 min, chromatogramme 2 (tr) acétate de mannitol = 9,1 min

A.N : pour l’acétate de galactitol chromatogramme témoin , les valeurs des temps de rétention calculés pour notre chromatogramme témoin sont présentées dans notre tableau 1. [pic 5]

2) Détermination de  la nature du diholoside.

Notre chromatogramme « essai », est composé de trois pics, le premier est celui du témoin interne l’acétate de mannitol. Ce qui veut dire que notre diholoside est composé de 2 oses différents, en l’occurrence galactose et glucose, ce qui signifie que notre tube contenait avant hydrolyse du Lactose. De plus avec le calcul des (tr) des 2 pics de notre essai, nous obtenons, un tr (relatif)  = 1,1 qui correspond à notre valeur trouver pour l’acétate de galactitol témoin, et un tr (relatif)  = 1,23 qui correspond à la valeur de l’acétate de glucitol déterminée grâce à notre témoin.  Cela nous confirme que notre diholoside est composé de Galactose et de Glucose et qu’il s’agit donc du Lactose.

3) Calcule des différents rendements de la dérivation.

Nous allons d’abord calculer la quantité (Q) d’acétate d’alditols injectés, pour notre essai et notre témoin.

TEMOIN :

D’après les données du fascicule, nous savons que le mélange témoins est constitués d’acétates d’alditols obtenu par dérivation à partir d’un mélanges d’oses simples (Mannose, Galactose et Glucose) à une concentration de  5,184 mg/ml chacun.  On a donc une concentration massique Cm = 5,184 mg / ml.

Pour déterminer la concentration du Mannose on effectue le calcul suivant  , avec M : la masse molaire du Mannose qui est de 180 g.mol-1. [pic 6]

A.N : Donc : C mannose = -1      , on sait que n mannose = C mannose x V mannose[pic 7]

Le volume de départ injecté correspond à 1,2 µL, ce qui fait 1,2.10-3mL, donc n mannose = 2,88 x 10-5 x 1,2. 10-3 = 34,6 nmol.

D’après les données du fascicule il est indiqué que le rendement de dérivation est de 100%. Autrement dit on peut affirmer que la quantité d’ose simple est égale à la quantité d’acétates d’alditols.

• Donc : n ose = n acétate d’alditols, et donc que, n mannose  = n acétate de mannitol = 34,6 nmol. 
• On peut donc dire que : n acétate de mannitol = n acétate de glucitol = n acétate de galactitol = 34,6 nmol. 

ESSAI :

D’après les données du fascicule notre diholoside inconnu est à 50 mg/ml pour déterminer la quantité :

• n diholoside = 180  x 2 - 18 (molécule H2O) = 342 g.mol-1 .

Donc pour déterminer la concentration de notre diholoside C diholoside  =  = -1[pic 8][pic 9]

Le Volume dans lequel est contenu notre diholoside est de 100 µL, qui fait 100 x 10 -3 ml, pour déterminer la quantité on effectue le calcul suivant :

• n diholoside = C diholoside x V diholoside = 1. 46 x 10 -4 x 100 x 10 -3 = 14 620 nmoles

Le Mannose lui toujours d’après les données du fascicule est à 10 mg/mL dans un volume V = 100 µL.

• n mannose =  = 5556 nmol de Mannose. [pic 10][pic 11]

Après avoir effectué les différentes étapes de dérivation après hydrolyse de notre diholoside pour pouvoir identifier les différents oses qui le composent, sachant que nous avons injecté un volume de 1,2 µL pour notre « essai », nous allons tenter de déterminer les quantités injectées en utilisant notre témoin.  

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