Cytogenetique

Cytogénétique

• Les fragments d’ADN peuvent être intégrés dans différents types de vecteurs en fonction de la taille de la séquence d’ADN.
• Type de vecteurs : plasmide, phage λ, cosmide, PAC ( P1 phage artificial chromosome), BAC ( bactérial phage chromosome), YAC.

1. CGH = Comparative genomic hybridization

• Principe :

• Cohybridation sur métaphases normales

1. ADN modifié (tumoral) marqué par un fluorochrome vert
2. ADN normal marqué par un fluorochrome rouge

• Par analyse d’image, calcul du ratio d’hybridation de chacun des 2 ADN le long de chaque chromosome

• C’est donc une technique quantitative équimolaire (même proportion), qui donne l’emplacement exacte du gain ou de la perte

• Etablissement d’un caryogramme du prélévement
• Recherche de gain ou de perte de segment dans le chromosome
• En onco-hématologie :

• Gain (vert) ou perte (rouge) d’onocogène
• Gain ou perte de gènes suppresseurs de tumeurs

1. CGH array

• On marque dans un premier temps l’ADN du patient avec de la Cy 3 et avec de la Cy5 celui du témoin => Résultats
• On réalise la même expérience mais l’on inverse les marqueurs => Résultats

• Quand 2 tests sont identiques mais qu’on obtient des graphiques inversés, on parle d’ « effet miroir »

Notes:

• Les chromosomes 1, 9, 16 et Y contiennent beaucoup d’hétérochromatines (= séquences répétées), leurs séquences appairaissent alors sous forme de triangle dans les graphs.
• Il existe des séquences polymorphiques connus qui sont stockés dans certaines banques de données[pic 1]

Exemple :[pic 2][pic 3][pic 4]

                                    [pic 5][pic 6][pic 7][pic 8][pic 9][pic 10][pic 11][pic 12]

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