Compte Rendu sur la Microbiologie

Parmi les nombreuses branches des sciences du vivant, la Microbiologie est sans doute la plus complexe d'entre elles. Les organismes étudiés ont une certaine particularité, en effet leur petite taille, de l'ordre du micron, nécessite l'emploi d'une batterie de techniques pour les étudier, tel que la microscopie, les cultures etc... Ces micro-organismes, petits et invisibles, sont très nombreux et ils ont colonisé toute la biosphère en premier, y compris les environnements extrêmes qu'ils sont les seuls à occuper.

Durant ces trois séances de travaux pratiques, nous avons pu être initier à diverses techniques de manipulations aseptiques, nous avons pu observer en immersion des bactéries à l'aide de coloration ou non, ou bien des milieux de gélose spécifiques à chacun. Nous également eu la possibilité de réaliser des tests pour déterminer des propriétés propres à certains micro-organismes. Toute précaution devait être prise, afin d'éviter les contaminations en manipulant ces bactéries, mais également afin d'éviter de fausser les résultats que nous avons obtenu lors de chacune de nos manipulations. Dans cette zone stérile, nous avons pu effectuer diverses expériences, tout d'abord lors de la première séance, nous avons pu observer une macération d'herbe, dont on ne parlera pas dans notre compte-rendu, nous avons également étudier un mélange bactérien, en pratiquant un état frais, une coloration de Gram et un ensemencement sur divers milieux gélosés avec pour objectif d'identifier plus précisément les bactéries présentes dans le mélange, de les décrire et de déterminer quelques une de leurs caractéristiques. Lors de la séance suivante, nous avons pu observé les colonies dans les milieux gélosés que nous avons coulé précédemment. Nous avons également fait un test antibiogramme sur les bactéries Gram - , afin de déterminer la sensibilité des bactéries à tels ou tels antibiotiques. Nous avons réalisé un test respiratoire sur les bactéries Gram + également afin de préciser leur type de respiration. Enfin nous avons également compté les bactéries présentes dans une crème glacée afin de déterminer si celle-ci est conforme ou non aux normes. Lors de la troisième et dernière séance, surtout basée sur de la coloration, nous avons coloré des spores de bacilles afin de d'y observer la phénomène de sporulation et de déterminer de quelle bactérie il s'agit. Nous avons également effectuer une coloration de Gram sur un yaourt et sur un frottis buccal qui nous permet d'observer les particularités des micro-organismes que nous avons trouvé.

C'est à travers de ces trois séances et ce compte-rendu que nous pourrons exprimer toutes les connaissances que nous avons appris et compris à travers les nombreuses expériences effectuées. L'apprentissage de diverses techniques, l'interprétation de chaque résultat que nous avons obtenu, la découverte des caractères culturaux des bactéries seront les objectifs principaux de l'ensemble de ces manipulations. Nous allons désormais nous intéresser de plus près à chacune de ces expériences en présentant les résultats obtenus, en tachant de les comprendre et d'en apporter quelques explications à ceux-ci.

1ère séance :

Étude d'un mélange bactérien

Le mélange bactérien qui nous a été présenté comportait deux types de bactéries que nous allons tenter d'identifier, à l'aide de différentes méthodes.

Tout d'abord, nous allons procéder à un état frais, qui nous permet d'observer des bactéries vivantes. On peut ainsi remarquer leur mobilité et leur forme malgré que ces micro-organismes apparaissent transparents au microscope. En prélevant à l'aide d'une anse de platine dans la zone stérile, nous avons pu observer sur une lame, deux types de bactéries, une de forme allongé, des bacilles, et une autre, de forme ronde. A l'objectif (x100) et (x400), rien n'est visible, cependant à l'objectif à l'immersion, on observe les colonies présentées précédemment qui se déplace à contre courant de l'huile. Elles sont donc vivantes au moment où nous avons fait notre état frais. Certaines bactéries sont en amas et d'autres se déplacent, des caractéristiques propres à chacun des types que nous avons annoncé, d'autres expériences nous permettront de déterminer cela.

La deuxième étape de cette étude, correspond à l'observation des bactéries de ce mélange, en effectuant une coloration de Gram. Cette méthode est un des premiers stades de l'étude bactériologique, on peut ainsi classer les bactéries en deux groupes, les Gram- et les Gram+. Les Gram+ ont la particularité d'avoir une paroi peptidoglycane plus épaisse, elles apparaissent en violet. Les Gram- ont une paroi peptidoglycane moins épaisse et sont recouvertes d'une membrane phospholipide, elles apparaissent en rose. Ici les coques apparaissent en violet, ce sont donc des bactéries Gram+ et les bacilles apparaissent en rose, elles sont donc Gram- , mais ceci n'est pas une généralité. Les coques ont une disposition spécifiques propre à une espèce ou un genre bactérien, ici les coques forment un amas, ce sont donc des staphylocoques. Les bacilles quand à eux, sont tout seuls ou par deux.

Dessin d'une coloration de Gram d'un mélange bactérien à l'objectif à l'immersion (x1000)

La troisième étape consiste à observer de plus amples informations sur les deux colonies de bactéries observés. Pour cela, nous allons utilisé des milieux de culture répondant à des exigences particulières. Pour procéder à l'isolement des bactéries et ainsi séparer les bactéries présentes afin de les observer plus nettement, nous allons coulé quatre milieux différents dans des boites de Pétri. Tout d'abord, nous exécuterons ceci dans un milieu non sélectif, le milieu GNO afin de décrire les deux types de colonies. Puis, nous ferons la même chose dans trois autres milieux gélosés, mais cette fois-ci, sélectifs. Tout d'abord, le milieu EMB qui permet de voir si les entérobactéries dégradent le lactose ou non, on pourra ainsi dire en fonction de la couleur de ces bacilles, si elles sont lactose+ ou lactose- . Le milieu de Chapman lui permet de déterminer s'il s'agit d'un Staphylocoque doré ou alors une toute autre espèce de coques. Enfin, le milieu D-Coccosel nous permettra

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