Cisgenèse

l’objectif de cette étude ou expérience est d’obtenir une variété de pommes améliorées

pour une résistance durable à la tavelure, pour cela on a utilisé une technique qui est la

cisgenèse qui va être expliqué dans les diapositives suivantes par ma collègue Cylia.

MATERIEL ET METHODE :

En premier lieu on a utilisé des lignées de pommes transgéniques depuis lesquelles après

recombinaison on a réussi à régénérer des lignées de pommes dites cisgenqiue, par la suite

on a réalisé une extraction de L'ADN génomique des plantes des lignées trans- et cisgéniques

'Gala' afin de détecter et quantifier les intégrations du backbone (squelette).

Après pour chacune des trois lignées transgéniques à savoir T7.1, T11.1 et T12.1, une PCR

inverse génotypique (iPCR) a été utilisée pour isoler les régions génomiques de 'Gala'. Et pour

confirmer le nombre d'événements d'intégration obtenus par hybridation en utilisant la

méthode de Southern blots, une seconde hybridation à l'aide d'une sonde PCR sur Rvi6 a été

réalisée.

Ensuite une RT-PCR quantitative en temps réel sur ADNc a été utilisée pour évaluer le niveau

relatif d'expression du gène Rvi6 dans les lignées transgéniques et cisgéniques. Les plantes

'Gala' et 'Florina' ont été utilisées respectivement comme témoins négatif et positif. Sachant

que Gala' ne contient pas le gène Rvi6, tandis que 'Florina' est un cultivar résistant à la

tavelure du pommier et portant le gène Rvi6. L'expression de l'ARNm Rvi6 mesurée pour

'Florina' a été utilisée comme référence pour normaliser l'expression mesurée pour les autres

lignées.

Finalement, afin de tester la résistance à la tavelure on a inoculé le champignon qui provoque

la tavelure V. inaequalis dans des plantes de serre greffées de chaque lignée cisgénique. Des

plants greffés de 'Gala' provenant d'une culture in vitro non transformée ont été utilisés

comme témoins sensibles. Et Comme témoins résistants on a utilisé des plantes greffées de

'Florina'. Au moins trois plantes avec une pousse par ligne ont été inoculées pour chaque

ligne de plantes utilisée.

Conclusion :

Et enfin pour conclure, Pour les deux lignées cisgéniques une seule insertion a été observée

et, malgré une très faible

...