Caryopse de maïs

Compte-rendu TP

Questions :

1. Donner le principe de dosage de l’activité alpha-amylase

    L’objectif du TP est de mesurer l’activité d’alpha-amylase au cours de la germination du caryopse de maïs. Pour cela, on va déterminer la quantité d’amidon contenu dans différentes phases de développement du caryopse de maïs : grain sec, grain imbibé 24h, grain imbibé 48h et germé 72h, chacun à 2 moments particuliers : à T0 et à T5 min. On va donc réaliser un dosage afin d’obtenir un courbe d’étalonnage et ainsi de déterminer graphiquement la quantité d’amidon dans les différents grains. On va donc ensuite soustraire T0-T5 qui va nous donner la quantité d’amidon dégradé durant 5 min ce qui permet d’avoir l’activité de l’alpha-amylase. En effet, plus la quantité d’amidon dégradé est grande, plus l’activité de l’alpha-amylase est importante et inversement.

1. Pourquoi mesure-t-on une activité spécifique de l’enzyme ?

Au cours de son développement, l’embryon a besoin de glucose. Pour cela, après hydratation de la graine, l’embryon va synthétiser des gibbérellines qui vont migrer dans les couches aleurones et ensuite synthétiser et sécréter des hydrolases dont l’alpha-amylase dans l’albumen amylacé où se trouvent les réserves d’amidon. L’alpha-amylase dégrade l’amidon en glucose donc mesurer l’activité spécifique de cette enzyme revient à connaître le temps nécessaire à la synthèse de glucose après hydratation. Pour déterminer son activité, on regarde la quantité d’amidon hydrolysée puisqu’il existe une relation de proportionnalité entre quantité d’alpha-amylase et quantité d’amidon hydrolysée.

1. Lors du dosage de l’enzyme, il est préconisé de diluer l’extrait de grains germés 72h : expliquez pourquoi ?

Il faut diluer l’extrait de grain germé 72h car il est très concentré en alpha-amylase ce qui provoque une saturation du à une dégradation rapide de l’amidon. En effet, le risque si on ne le dilue pas, c’est d’avoir une dégradation complète de tout l’amidon présent de manière très précoce qu’on ne pourrait pas mesurer sa DO et ainsi calculer la dégradation de l’amidon.

1. Quelles activités alpha-amylase spécifiques les extraits issus des grains secs, inhibés 24h, 48h et germé 72h ont-elles été mesuré expérimentalement. Fournir le tableau des résultats du binôme.

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