Biochime

Experimentatio, fig 1

Pour cette expérience les chercheurs ont voulu étudier tous les gènes de la beta-tubuline chez la souris en développement et chez l’être humain. Tout d’abord, la PCR fluorescente est une technique permettant d’exprimer le niveau d’expression en temps réel. En effet cette méthode permet d’obtenir à partir d’un échantillon complexe et peu abondant d’important quantité d’un fragment d’ADN spécifique et de longueur définie. Son principe repose sur la probabilité de suivre la quantité d’ADN à tout instant. Il s’agit de mettre en place des sondes fluorescente soit sur l’ADN double brin ou bien sur une séquence précise pour déterminer si le fragment est bien présent. Par ailleurs, la fluorescence émise reflète d’amplicon généré pendant la PCR. Nous pouvons constater d’après les résultats donnés que le gène TUBB5 est très exprimé en semaine gestationnelle 14.5. Pareil pour l’homme en semaine gestationnelle 22 et 13 mais reste tout de même fortement exprimé dans le développement embryonnaire de la souris et dans le cerveau humain.

[pic 1]

Les chercheurs ont voulu ensuite l’expression spatiale par hybridation in situ .En effet, cette technique permet de visualiser la présence d’ADN ou d’ARN spécifique à l’intérieur d’une cellule ou d’u tissu par l’utilisation d’une sonde fluorescente correspondant à une séquence d’acide nucléique complémentaire à un gène cible. Ainsi ils ont pu constater aux jours 12.5 ,14.5,16,5 une forte expression dans tout le cortex et plus particulièrement dans la zone subventriculaire.

[pic 2]

 Puisque qu’il n’ont pas trouver d’anticorps spécifique ,ces derniers ont démontrer que TUBB5 est exprimer dans les cellule par des protéine fluorescence verte (GFP) en créant une ligné de souris transgénique qui conduit la protéine fluorescente grâce au promoteur endogène tubb5 pour exprimer quel type cellulaire exprime tubb5.Ainsi ils ont constater que tubb5 est exprimer dans les cellules gliales radiales (pax6 +) dans les progéniteurs intermédiaires (tbr2 +) dans les neurones migrateurs  (Dcx +) et dans les neurones  post-mitotique (Tuj+).

[pic 3]

FIGURE 2

Les chercheurs ont voulu étudier l’épuisement de tubb5 sur le développement cortical chez la souris  en employant l’ARN d’épingle à cheveux ciblant sont 3’ UTR .En effet, ces ARN adopte une structure en tige et boucle pour réduire l’expression d’un gène cible via un phénomène d’interférence par l’ARN. L’expression des shRNAS dans les cellules se fait le plus souvent par des plasmides ou des vecteurs viraux employé in vitro ou des vecteurs bactérien.Enfin une fois ce shRNA dans les cellules neuro-2A

Effets des mutations humaines sur le développement neuronal murin

Les chercheurs ont voulu examiner l’effet de ces mutation in vivo par electroporation dans le but de surexprimer les formes mutante de tubb5 dans le cerveau des souris en développement .Cette technique consiste à déstabiliser les membranes cellulaire pour augmenter leur perméabilité en leur appliquant un champ electrique.

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