TP sur les anticorps contre l'Albumine Sérique Bovine

I-But de la manipulation:

- Dans se TP, on cherche à mettre en évidence l’existence d’anticorps spécifique dirigé contre l’Albumine Sérique Bovine (BSA) dans le sérum d’un lapin après injections répété de cette protéine, mais aussi un titrage du sérum hyper immunisé par une technique immuno- enzymatique (ELISA).

II-Principe de l’ELISA :

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1- On mette l’antigène (BSA) sur les parois d’une plaque expérimental a 96 puits.

2- Lavage pour éliminer d’excès d’antigène non fixé sur les parois.

3-On ajoute du sérum hyper immunisé de lapin et qui contient des anticorps anti-BSA.

4- Lavage pour éliminer le sérum et le reste d’anticorps non spécifique à l’antigène BSA.

5- On ajoute des anticorps secondaire de chèvre anti-anticorps de lapin, couplé à l’enzyme phosphatase alcaline.

6- Lavage pour éliminer les anticorps secondaire non fixé.

7- On ajoute le substrat de l’enzyme pNPP (para-Nitro Phényle Phosphate.

8- Hydrolyse de ce substrat par l’enzyme donne un produit coloré et l’absorbance est mesurée par spectrophotométrie.

III- Méthodes expérimentale :

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