Le génome

I. Table des matières

II. Introduction 1

1. Historique 1

2. Définition 1

III. ADN 1

1. Purification des ADN 1

2. Les enzymes utilisées en génie génétiques : 2

3. Migration des Acides Nucléique 2

II. Introduction

1. Historique

Premier transfère 1977 très important

Une plante transgénique : on a transférer un gène dans le génome de cette plante lui donnant caractère avantageux : de gout ou de taille pour le fruit (on parle d’avantage agroalimentaire), résistance aux maladies, ou résistance aux herbicide.

Premier succès de thérapie génique sont fait sur les enfants bulle en 2000 (on a guérie 9 patients).

2. Définition

C’est un ensemble de technique permettent :

-d’isoler des gènes, des séquences d’ADN

- de les étudier

-de les amplifier

-de les modifier

-de les transférer

Les objectifs sont :

- Scientifique pour améliorér la connaissance des gènes et des génomes

- Médicaux pour diagnistiquer des maladies unniées (diagnostic pré, post-natal), diagnostiquer des maladies acquises (diagnostic infexieux),

III. ADN

1. Purification des ADN

On lyse les cellule en ajoutant du SDS ( pH très acide qui déroule l’and et donc le dénature), puis on élime des protéines (ex : phénol/ Chloroforme (supprime protéine car phénol a densité plus lourde que la phase aqueuse, après centrifugation on obtient Phénol en bas, protéine après et phase aqueuse en haut, on extrait la phase aqueuse et on élime le phénol avec du chloroforme), colonnes) et enfin on fait précipiter les acides nucléiques (en ajoutant 2 volume éthanol, on centrifuge puis on met dans le froid puis enfin on voit apparaitre l’acide nucléique dans le culot).

Purification des ARN messager : sur colonne poly U (ou T)

Arn messager s’hybride par leur queue poly A aux billes,

1ere élution : ARNr et 2ème élution on trouve les ARNm

2. Les enzymes utilisées en génie génétiques :

ENZYMES DE RESTRICTION (coupe ADN double brin)

La bactérie produit des enzymes pour couper des virus bactériens (phage). Ces enzymes de restriction reconnaisse des sites de restriction sur le phage (bien que l’Adn de la bactérie possède ces sites aussi mais ils sont méthylé et donc pas reconnue par l’enzyme)

Endonucléases :

On coupe séquence palindromique ce qui libère des extrémités cohésives

Cas ADN circulaire

5’- G/GATCC-3’  3’OH GATCC---------------------------------------------- G 5’P

CCTAG/G 5’P G----------------------------------------------------- CCTAG 3’OH

Extrémiter non franche

5’------G/GATCC------3’  Bam H1 : 5’P G----------GATCC 3’OH

3’------CCTAG/G------5’ 3’OH CCTAG ---------G 5’ P

EcoR1 : 5’------GGATCC------3’

3’------CCTAGG------5’

Extrémité cohésive avec Bam 3’ sortante et EcoR1 5’ sortante

Il existe également des enzyme qui coupe de façon franche (résout les problèmes de compatibilité)

3. Migration des Acides Nucléique

Migration sur un gel d’agarose (agarose + eau : en fonction de la quantité d’agarose on a une tram a l’intérieur du gène qui est plus ou moins compact)

2% agarose très serré, 1% moins serré

Petit gragment adn passe bien dans adn très sérré, mais grand fragment ne passe pas

Petit fragment sont evacué pas moin sérré, et grand fragment passe dans le moin séré

Adn est attiré par pole positif et donc migre dans le gel d’aggarose en fonction de leur taille (presque proportionnel)

Refaire diapo

Ajout de groupement de bromure d’ethidium, agent intercalent, mutagène et permet de rentre l’ADN phosphorescent.

Quand on fait migrer en ADN linéaire, il migre en fonction de sa taille

Un ADN circulaire est plus petit et donc va naturellement plus loin de le gel, de plus un ADN non digéré peut être un plasmide donc circulaire, mais peu également se transformer en forme superenroulé, forme très compacte et donc migre super loin. La bactérie peut également faire de long fragment appeler concaténeraire et ainsi déroule son ADN

An fait faire migrer un ADN non digéré, on obtient différente taille correspondant à la compaction de l’ADN mais on ne peut pas savoir la taille réelle de l’ADN pour ça il faut le digéré.

Migration ARN bactérien :

ARNr taille défini

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