Spectrophotomètrie

Résumé

Introduction

Les molécules, notament les acides aminé ou l’es protéine possède la propriété d,absorbé une certaine quantité de la  lumière dans l’ultravioloet ou l’invisible.chacune de ces molécules absorbent donc la lumière a des degrés de concentration différente.c’est ce que décrit en effet la loi de béer Lambert.

Pour mesure la capacité d’absorbance ou de transmittannce de chaque composé , on a recourt a la spectrophotométrie, c’est un procédé qui permet de mesure la quantité de lumière absorbée par une substance lorsque cette dernière est traversé par un faisceau de lumière, l’appareil utilisé lors de la scpetometreie est le spectrophotomètre.On distingue notament dès spectrophotometre UV-visbile et lés spectrophotomètre IR.

La spectrophotométrie est utilisée dans plusieurs domaine scientifique tel que la médecine, la biologie,chimie, physique. Son rôle le plus universelle est l’analyse quantitatives des échantillons.En biologie moléculaire par exemple , il est utilisé l;ors de l’extraction de l’ADN, pour le quantifier et déterminer sa pureté. En médecine clinique on y a recour aussi pour l’analyse cinétique de différent enzyme sanguine, pour l,hemoplyse du sang.

Dans cette expérience Nous analyseron la concentration d’hémoglobine à différent concentration dans une solution saline(Nacl :0,85%). L,hémoglobine joue un rôle très important dans notre organisme , C,est en effet cette protéine se trouvant dans le sang et  qui permet d’iriguer tout le corps humain en oxygène, grâce a sa capacité a fixer ce dernier.

L,hémoglobine permet aussi en effet d’identifier un sang hemolysé , car lors de là d’instructions d’eau globules rouge, elle colore le plasma plus ou moin fortement selon le degre des globules rouge brisé.

Au laboratoire on  anlysera donc  différent melange d’hémoglobine et de saline, à des concentration différente, puis detereminer le spectre d,absorbance de l’hemoglobine et afin tracer sa courbe standard d,absirbtion en fonction de la concentration de l’Hb.

Les objectifs de cette expérience sont de s,acclimater avec l’uttulisation du spectromètre,de définir et comprendre la loi de béer Lambert, de savoir tracer le spectre d’absorption de différent composé et afin  de doser l’hémoglobine a partir d’un étalon pré-étable.

Matériel et Méthodes

Nous avons suivie les protocoles éxperimentale se trouvant dans le cahier de laboratoire de Laboratoire de Biochimie I (BICH 3872)

Résultats

Pour pouvoir tracer nos spectre d’absorbance et établir notre courbe d’etalonage, il nous a fallu préparer plusieurs échantillons d’hémoglobine dilués à la saline.

Sachant que : C1.V1 = C2.V2

Pour obtenir une concentration hémoglobine de 0,1 mg\L, il faut :

 1,0.v1=0,3.1.0

V1= 0,3 ml de Hb et donc 0,7 ml de saline

Tableau 1. Dilution de l’hémoglobine avec de la saline

Fig 1

[pic 1]

La lecturedes absorption de 380 à 600 nm par balayage de l’hémoglobine conentré à 01mg/ml dans la saline  nous a permit de dresser ce spectre.

Ce graphique montre que l’hémoglobine a une forte absorption aux alentour de 400 et 420 nm, cela est tout a fait le résultat attendu car rappellerons le , l’hémoglobine est une protéine de couleur violette dans dans le spectre de la lumière, cette couleur a une longueur d’onde de 380 à 430 nm.

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